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小爱实验Tips：WB实验之大分子量蛋白转膜

时间：2019-08-21 点击次数：19565

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做WB实验转膜时，分子量较大的蛋白较为费时且困难。要实现良好的转膜效率，您可能需要一些小tips。

如上图所示，转膜常用湿转和半干转的方式，小爱常规推荐湿转，即滤纸-凝胶-膜-滤纸“三明治”完全浸入缓冲液中，可参考的转膜条件为：转膜至0.2 μm 孔径的NC膜，在冷却的含20%甲醇的转移缓冲液中转膜，70V，1.5h（膜、甲醇含量、电压和转膜时间均可优化调整）。

那么大分子量蛋白的转膜需要如何优化条件呢？

1）适当降低凝胶浓度

大分子量蛋白可更加有效地从低浓度的凝胶中转移出来，但凝胶浓度过低容易被撕裂、不太好操作。可以考虑针对蛋白分子量选择6-8%的丙烯酰胺凝胶。当然，您也可考虑选择小爱家的梯度凝胶预制胶产品来有效分离更大分子量范围的蛋白。

2）添加SDS

分子量较大的蛋白容易在凝胶中沉淀，在转膜缓冲液中添加不超过0.1％的SDS可以有效阻止其发生，同时SDS也会抑制蛋白与膜的结合，故其浓度不宜高、且需优化转膜条件以防止蛋白透过膜。

3）降低甲醇浓度

甲醇与SDS具有相反的作用，甲醇可以增加蛋白与膜的结合，它可从蛋白质中剥离SDS。降低转膜缓冲液中甲醇浓度也有助于防止蛋白沉淀。一般我们可以将浓度降低至10％或更低。

4）考虑选择较低电压、较长时间、湿转的方式

湿转的效率更高，可以考虑较低电压下过夜转膜。

爱必信相关产品推荐：

实验步骤	推荐指数	货号	产品名称	规格
转膜		abs931	PVDF膜0.2 μm	20张
	★★	abs932	PVDF膜0.45 μm	20张
	★★	abs959	NC膜0.2 μm	20张
		abs960	NC膜0.45 μm	20张
缓冲液		abs950	10*电转液	100ml,1L
		abs951	running buffer	100ml,1L
		abs952	10*TBST	100ml,1L
预制胶	★★	abs9301	预制胶 10%,10 wells	5片/盒
	★★	abs9308	预制胶 10%,15 wells	5片/盒
	★★	abs9302	预制胶 12%,10 wells	5片/盒
	★★	abs9309	预制胶 12%,15 wells	5片/盒
		abs9303	预制胶 15% ,10 wells	5片/盒
		abs9310	预制胶 15% ,15 wells	5片/盒
		abs9304	预制胶 4-15%, 10 wells	5片/盒
		abs9311	预制胶 4-15%, 15 wells	5片/盒
	★★	abs9305	预制胶 4-20%, 10 wells	5片/盒
	★★	abs9312	预制胶 4-20%, 15 wells	5片/盒
		abs9307	预制胶 8%, 15 wells	5片/盒
		abs9306	预制胶 8-20%, 10 wells	5片/盒
		abs9313	预制胶 8-20%, 15 wells	5片/盒
蛋白染色		abs9255	Ponceau S solution	500ml
	★★★	abs964	考马斯亮蓝染色试剂盒(常规型)R250	1kit
		abs965	考马斯亮蓝染色试剂盒(增强型)G250	1kit
		abs966	Genshare考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液	500ml

Absin特色产品线（全部现货）：
WB相关：ECL发光液、预染marker、预制胶；IHC相关：二抗试剂盒、组化笔；IP/CoIP试剂盒；激动剂/抑制剂；血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE；凋亡试剂盒；呼吸爆发试剂盒；ELISA试剂盒；重组蛋白；抗体: 二抗、标签抗体、对照抗体；定制服务(抗体/多肽/蛋白/标记/检测)...

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