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免疫印迹(wb实验)常见问题解答之孵育和检测

时间：2019-08-21 点击次数：3763

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1）如果没有注明可以用来做Western blot的一抗，可以用于Western blot实验吗？

这个要看情况的，因为有的抗体是识别线性表位的,有的是识别构象型表位的，识别构象型表位的抗体不能用于Western blotting实验，因为在Western blotting中抗体识别的是完全变性的蛋白质抗原，而蛋白质抗原的构象型表位变性时被破坏。

2）做wb实验每次只加一种一抗，可以同时加两种或者多种一抗的吗？

最好还是不要同时加两种及两种以上一抗。因为如果结果里面有非特异信号的话，就说不清楚了。做免疫印迹实验中在同一张膜上检测目的蛋白和内对照，也是先上目的蛋白的一抗、二抗，ECL发光检测、压片、洗片；漂洗以后，再上内对照的一抗、二抗，ECL发光检测、压片、洗片。

3）wb实验中用一抗,单抗好些还是用二抗及多抗好些？用于Western blot的抗体和用于ELISA的抗体有什么不同的要求？

作为Western blot来讲，理论上单抗比多抗的特异性要好，但单抗种类较少一般价格偏高，爱必信的一抗，种类比较全，价格也比较合理。用于wb实验的抗体和用于ELISA实验的抗体，一般来说用于Western blot 实验的抗体识别的是氨基酸序列特异性；而可用于ELISA实验的抗体则要看抗原种类，有些是识别氨基酸序列特异性，有些是识别构像特异性。所以一般根据抗体说明书来确定。

做免疫印迹实验时选择抗体主要应考虑两个问题，一是所选抗体是否能识别凝胶电泳后转印至膜上的变性蛋白，另一个是所选抗体是否会引起交叉反应条带。

4）结合ECL化学发光检测之后显影发现胶片上的条带是空心的，而且荧光很快就没了？

一种情况是POD浓度高ECL很快被淬灭掉，导致蛋白丰度越高的地方反而没带，边缘地带反而有显色。

5）要做磷酸化某因子Western blot实验，其二抗有何要求？

这个对二抗无要求，要看你实验条件来选择，一般推荐用HRP标记的二抗，爱必信二抗的质量过硬，价格公道且种类比较全，建议爱必信官方网站查一下。

爱必信生物作为高品质生命科学产品的中国品牌，可提供全面优质的wb实验相关产品。

WB实验孵育和检测相关产品推荐：

实验步骤	推荐指数	货号	产品名称	规格
一抗孵育		abs830001	Anti- GST	50ul,100ul
		abs830002	Anti- His Tag抗体	50ul,100ul
		abs830003	Anti- His(C-terminal Specific) 抗体	50ul,100ul
		abs830004	Anti- Myc 抗体	50ul,100ul
		abs830005	Anti- DYKDDDDK	50ul,100ul
		abs830006	Anti- HA 抗体	50ul,100ul
		abs830008	Anti-V5,mAb	50ul,100ul
		abs830010	Anti- GST,HRP	50ul
		abs830011	Anti- His Tag (HRP) 抗体	50ul
		abs830012	Anti- His(C-terminal Specific) (HRP) 抗体	50ul
		abs830013	Anti- Myc (HRP) 抗体	50ul
		abs830014	Anti- DYKDDDDK,HRP	50ul
		abs830015	Anti- HA (HRP) 抗体	50ul
		abs830016	Anti- V5 (HRP) 抗体	50ul
		abs137956	C-Myc-Tag Mouse Monoclonal Antibody	50ug,100ug
		abs137958	Flag-Tag Mouse Monoclonal Antibody	50ug,100ug
显色	★★★★★	abs920	ECL化学发光检测试剂盒	225ml,250ml,2*250ml
		abs9212	DAB 显色试剂盒（棕黄色，WB）	1kit
		abs9213	DAB 显色试剂盒（紫蓝色，WB）	1kit
其他辅助试剂		abs952	10*TBST	100ml,1L
		abs9152	Tween-20	500ml
	★★	abs954	WB专用一抗二抗稀释液	100ml
		abs969	Western一抗二抗去除液（中性）	250ml
		abs968	Western一抗二抗去除液（弱碱性）	250ml
		abs967	Western一抗二抗去除液（强碱性）	250ml
新手必备	★★★★★	abs926	WB solution base kit（rabbit）	1kit
	★★★★★	abs927	WB solution base kit（mouse）	1kit
	★★★★★	abs928	WB solution base kit（goat）	1kit

Absin特色产品线：
WB相关：ECL发光液、预染marker、预制胶；IHC相关：二抗试剂盒、组化笔；IP/CoIP试剂盒；激动剂/抑制剂；血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE；凋亡试剂盒；呼吸爆发试剂盒；ELISA试剂盒；重组蛋白；抗体: 二抗、标签抗体、对照抗体；定制服务(抗体/多肽/蛋白/标记/检测)...

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