人淋巴细胞分离液操作protocol
时间:2017-04-23 点击次数:3348
本文首发公众号:爱必信生物
# 操作 Protocol # 一.试剂准备 1.样本体积: 4 ml(总)
2.盐缓冲液(可用PBS或生理盐水) A液配制
加950ml的蒸馏水溶解,用10 N HCl调节PH至7.6,最后定容至1L。
B液配制
1体积的盐缓冲液:取1体积的A溶液与9体积的B容液混合,每次操作至少需要 20 ml /次 ★每次实验需新鲜配置(可4℃保存一个星期)
二.分离步骤 1.使用前上下颠倒数次确保淋巴细胞分离液充分混合 2. 打开瓶盖,用移液管或注射器取淋巴细胞分离液 (4ml) 至离心管. 3. 取稀释后的血液样本(4ml)加入到离心管中 (Fig 1) V(血液:盐缓冲液:淋巴细胞分离液)=1:1:2
注意:轻轻加入样本形成分层,避免和淋巴细胞分离液混合 4.将离心管在18–20 °C,400g 离心 30-40 min 5. 轻轻移除上层分离液(血浆) 注:轻轻操作,避免淋巴细胞层和上层分离液混合
洗涤淋巴细胞以去除血小板操作步骤: 1. 吸取淋巴细胞层至干净的离心管,尽量减少吸取上下分层液的量(淋巴细胞分离液层会引起粒细胞污染;血浆层会引起血小板和血浆蛋白的污染) 2. 向离心管中加入至少3体积(6ml)的盐缓冲液 3. 使用巴斯德吸管轻轻吹打使淋巴细胞层与盐缓冲液充分混合 4. 使离心管在18–20 °C在60–100 g 离心 10分钟 5. 去除上层分离液 6. 再向离心管中添加6-8ml的盐缓冲液,用巴斯德吸管轻轻吹打使淋巴细胞与其充分混合 7. 18–20 °C,60–100 g 离心 10 minutes 8. 去除上层分离液即可. Absin特色产品线: 生化试剂(60万种)、抗体(10万种)、细胞因子、二抗、ECL发光液、蛋白marker、激动剂、抑制剂、凋亡试剂盒、BSA、动植物提取物、蛋白酶K... 爱必信(上海)生物科技有限公司 联系邮箱:info@absin.cn 公众平台:爱必信生物 |
促销资讯 更多