爱必信热卖单品ECL化学发光检测试剂盒,灵敏度更高,背景更低,稳定性更好。常备现货, 小编整理了ECL 的常见问题,助您的实验更顺利!
问题 |
原因 |
方法 |
白色条带黑色背景 |
体系中HRP过量 |
进一步稀释HRP 标记 |
膜上有棕色或黄色条带 |
背景发亮 |
信号弱或无信号 |
HRP过量,消耗底物 |
进一步稀释HRP 标记 |
抗原或抗体不足 |
增加抗体 |
使用超级ECL |
转膜失败 |
优化转膜条件 |
HRP 活性低 |
测试HRP 活性:暗室中,将1ul未稀释的HRP 放入装有1-2ml的基质工作
溶液的试管中。 几分钟内,溶液会立即发出蓝光。 |
高背景 |
HRP过量,消耗底物 |
进一步稀释HRP 标记 |
封闭不充分或使用了不适当的封闭试剂 |
优化转膜条件 |
洗涤不充分 |
增加洗涤时间和次数 |
膜过度曝光 |
减少曝光时间 |
抗原、抗体 过量 |
减少抗体上样量 |
抗体特异性差 |
优化抗体特异性 |
条带有斑点 |
转膜失败 |
优化转膜条件 |
x射线胶片与膜之间有气泡 |
去除所有气泡后,再曝光到胶片上 |
背景有斑点 |
形成聚合体 |
使用前通过0.2um过滤器过滤hrp -偶联物 |
电泳转移过程中温度过高 |
控制电泳和转移过程中的温度 |
非特异性条带 |
HRP-偶联物过量 |
进一步稀释hrp -偶联物 |
SDS导致非特异性蛋白结合 |
在免疫检测过程中不要使用SDS |
抗体特异性差 |
优化抗体特异性 |
Absin特色产品线:
WB相关:ECL发光液、预染marker、预制胶;IHC相关:二抗试剂盒、组化笔;IP/CoIP试剂盒;激动剂/抑制剂;血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE;凋亡试剂盒;呼吸爆发试剂盒;ELISA试剂盒;重组蛋白;抗体: 二抗、标签抗体、对照抗体;定制服务(抗体/多肽/蛋白/标记/检测)...
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